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*新型的檢測方法更實(shí)用

*也稱“金葡菌"，隸屬于葡萄球菌屬，是革蘭氏陽性菌代表，為一種常見的食源性致病微生物。該菌適宜生長溫度為37℃，pH為7.4，耐高鹽，可在鹽濃度接近10%的環(huán)境中生長。*常寄生于人和動物的皮膚、鼻腔、咽喉、腸胃、癰、化膿瘡口中，空氣、污水等環(huán)境中也無處不在。

檢測方法

一，傳統(tǒng)分離鑒定方法

世界上對食品中*的檢測通常采用生化鑒定的手段，并在初期采用平板劃線分離。當(dāng)前我國檢測食品中*依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)《食品微生物學(xué)檢驗(yàn) *檢驗(yàn)》(GB4789.10-2016) [4] 中的方法進(jìn)行。國家標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行內(nèi)容包括定性檢測和定量檢測兩部分。在無菌條件下接種到肉湯中進(jìn)行前增菌，將培養(yǎng)物接種劃線，根據(jù)生化鑒定方法進(jìn)行血清學(xué)鑒定。傳統(tǒng)生化鑒定方法操作簡單，穩(wěn)定性強(qiáng)，成本低，是目前常用的鑒定方法。

二，免疫學(xué)檢測方法

免疫學(xué)檢測方法主要是基于免疫學(xué)理論研究，其是通過設(shè)計(jì)的抗原、抗體和免疫細(xì)胞，檢測抗原和抗體的結(jié)合以及免疫細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子的，從而達(dá)到檢測目的一種實(shí)驗(yàn)方法。該技術(shù)方法主要包括酶聯(lián)免疫法、免疫熒光法、免疫膠體金法等 。

①酶聯(lián)免疫法：其原理是利用抗體與抗原在載體表面的特異性結(jié)合，加入某種酶，酶與抗體或抗原結(jié)合在一起，從而形成可以跟蹤抗體或抗原的標(biāo)記物，由于抗原或抗體與受檢樣品的反應(yīng)產(chǎn)生抗原或抗體的復(fù)合物，此時加入酶反應(yīng)顯色底物，產(chǎn)物的量的大小與檢測物質(zhì)的量的大小呈正相關(guān)，分析顯色從而確定樣品中待檢測物的含量。目前已經(jīng)開發(fā)了幾種根據(jù) ELISA 技術(shù)用于檢測培養(yǎng)上清液和食物樣品 (例如干酪，土豆沙拉，火腿和牛奶)中的* 。

②免疫熒光法：免疫熒光技術(shù)利用熒光色素對抗體或抗原進(jìn)行標(biāo)記，然后檢測目標(biāo)抗原或抗體?？乖涂贵w特異結(jié)合后，通過考察熒光信號的強(qiáng)弱進(jìn)行定性定量檢測。與酶介導(dǎo)的免疫測定相比，基于熒光的免疫測定具有提供高通量分析和靈敏度的更大潛力 。

③免疫膠體金法：該方法借助硝酸纖維膜為固定相載體，樣品溶液通過毛細(xì)作用在試紙條中移動，在試紙條中同時加入了針對待檢測物質(zhì)特異性的抗原或抗體。與 ELISA 技術(shù)相比，免疫膠體金技術(shù)操作更為簡單，對實(shí)驗(yàn)人員沒有特別的技術(shù)要求，適合基層單位和現(xiàn)場診斷。但是免疫膠體金相比較 ELISA 法而言，靈敏度更低，且使用范圍不廣，需要進(jìn)一步的研究?？傮w而言，免疫膠體金有著*的發(fā)展?jié)摿蛷V闊的應(yīng)用前景 。

三，分子生物學(xué)檢測方法

該技術(shù)主要包括聚合酶鏈反應(yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR）技術(shù)，核酸探針技術(shù)，環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)等技術(shù)。

①聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)：該方法的原理是在 DNA聚合酶的作用下，游離的脫氧核糖核酸參照堿基互補(bǔ)配對的原則，以模板 DNA為主鏈，通過提供一段引物，迅速的擴(kuò)增 DNA 的雙螺旋結(jié)構(gòu)。PCR 技術(shù)特異性強(qiáng)、敏感度高，已廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)等領(lǐng)域中。PCR 作為致病微生物的檢測方法，穩(wěn)定性強(qiáng)，是目前主流的檢測方法。在微生物檢測應(yīng)用中，引物的設(shè)計(jì)以及靶序列的選擇是 PCR 方法的核心。PCR 法同時也有一定的局限性，由于該方法需要對樣品進(jìn)行增菌，食品成分復(fù)雜，會對實(shí)驗(yàn)造成干擾。與其他方法相比，PCR 技術(shù)儀器設(shè)備價(jià)格高，需要花費(fèi)的成本較高，推廣普及需要一定的時間和資金支持。

②核酸探針技術(shù)：通過使用基因特異性核苷酸序列作為探針與目的 DNA 雜交的一種核酸雜交技術(shù)，通過檢測該段特異性的標(biāo)記物，從而判斷是否含有目標(biāo)微生物。核酸探針具有分子生物學(xué)檢測技術(shù)的靈敏度高、特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，但是實(shí)驗(yàn)周期長，操作繁瑣，如果樣品中目標(biāo)微生物含量過低，極易造成樣品目標(biāo)微生物未檢出，出現(xiàn)假陰性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

③環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)：該技術(shù)基于 DNA擴(kuò)增技術(shù)，能夠在恒溫條件下，根據(jù)設(shè)計(jì)的多對引物，利用鏈置換型 DNA 聚合酶快速的進(jìn)行核酸的擴(kuò)增。與 PCR 方法比較，環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法操作更加快捷簡單，花費(fèi)成本較低，且對儀器要求低，能夠廣泛利用在食源性致病微生物的檢測中。