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帶您體驗(yàn)人硫氧還蛋白還原酶(TrxR)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)
更新時(shí)間:2018-03-28   點(diǎn)擊次數(shù):1061次

帶您體驗(yàn)人硫氧還蛋白還原酶(TrxR)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)

硫氧還蛋白還原酶是一種NADPH依賴的包含F(xiàn)AD結(jié)構(gòu)域的二聚體硒酶,屬于吡啶核苷酸-二硫化物氧化還原酶家族成員。硫氧還蛋白還原酶 thioredoxin reductase和硫氧還蛋白、NADPH共同構(gòu)成了硫氧還蛋白系統(tǒng).TrxR有很多生物學(xué)功能,與某些疾病的發(fā)病機(jī)制也密切相關(guān)。

由還原型 NADP催化硫氧還蛋白還原的酶。EC1.6.4.5.。含有一個(gè)分子的FAD。使氧化型硫氧還蛋白的胱胺酸殘基還原,變成一對半胱胺酸殘基,后者進(jìn)一步成為核糖核苷酸還原的電子供體。它存在于大腸桿菌、酵母、肝臟以及腫瘤細(xì)胞中。 

實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人硫氧還蛋白還原酶(TrxR)水平。用純化的人硫氧還蛋白還原酶(TrxR)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入硫氧還蛋白還原酶(TrxR),再與HRP 標(biāo)記的硫氧還蛋白還原酶(TrxR)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的硫氧還蛋白還原酶(TrxR)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人硫氧還蛋白還原酶(TrxR)濃度。

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實(shí)驗(yàn)中需要注意:

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

4. 請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計(jì)算時(shí)請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8.樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

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