膠原酶 I產(chǎn)品類型豐富，供應(yīng)
產(chǎn)品簡介
膠原酶（collagenase）是一種蛋白水解酶，常用來消化細(xì)胞外基質(zhì)蛋白。作為一種肽鏈內(nèi)切酶，膠原酶特異性識別Pro-X-Gly-Pro序列（高頻次出現(xiàn)在膠原collagen，很少出現(xiàn)在其他蛋白質(zhì)中）并切割氨基酸（X）和甘氨-酸（Gly）之間的肽鍵。商業(yè)化膠原酶來源于溶組織梭菌（Clostridium histolyticum）,是一種酶粗提物，因其所含組分不同分為I型膠原酶、II型膠原酶、III型膠原酶、IV型膠原酶、V型膠原酶等，根據(jù)其組分及降解特性又不同的用途。
I型膠原酶含有相對均量的多種酶活（包括膠原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白-酶等），通常用于上皮組織、肝、肺、脂肪和腎上腺組織的原代細(xì)胞制備。
II型膠原酶含更高的梭菌蛋白酶活性，通常用作心臟、骨、肝、胸腺、唾液腺及軟骨等組織的原代細(xì)胞制備。
III型膠原酶含較低的次級蛋白酶水解活性，常用于乳腺組織的原代細(xì)胞制備。
IV型膠原酶含較低的胰-酶活性，通常用于制備胰島細(xì)胞及髓系細(xì)胞。
V型膠原為部分純化型，含更高的膠原酶和酪蛋白酶活性，更低的胰-酶水平，適用于制備胰島。
使用說明
生化試劑的用法用量主要根據(jù)客戶的實驗?zāi)康暮同F(xiàn)有文獻(xiàn)或書籍中的實驗方法來決定，以下用途僅供參考。
1. 膠原酶儲存液的配制
向每管100mg的膠原酶中加入100µL的含Ca2+、Mg2+的HBSS（Hank’s平-衡鹽溶液，含Ca2+、Mg2+），輕輕旋渦震蕩使其充分溶解，制備成1g/ml（即1000×）的儲存液。然后用低蛋白結(jié)合性的0.22μm的濾膜過濾除菌，分裝成小份量，然后于-20℃避光凍存。
使用前于冰上解凍，避免反復(fù)凍融。其用于組織和細(xì)胞分散的常用濃度為：0.5-2.5mg/ml，用于軟骨消化的常用濃度為1-2mg/ml，需要根據(jù)特定的實驗條件或者參考相應(yīng)的文獻(xiàn)資料確定所需的佳工作濃度。
2．組織的分離
1）使用無菌手術(shù)刀或剪刀將組織切成3-4mm大小的組織塊；
2）利用含Ca2+、Mg2+的HBSS洗滌組織塊數(shù)次；
3）加入足量的含Ca2+、Mg2+的HBSS，使其浸沒組織塊，并加入膠原酶至需要工作濃度；
4）于37℃孵育4-18h。消化時使用水平搖床以及用3mM的CaCl2補(bǔ)充消化可以提高消化效率。
5） 已分散開的細(xì)胞可使用不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩篩得，收集備用。未*解離的組織另外添加適量的新鮮膠原酶工作液于37℃繼續(xù)孵育；
6）利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細(xì)胞數(shù)次；
7）細(xì)胞培養(yǎng)液重懸上述細(xì)胞，利用自動細(xì)胞計數(shù)器或其他方法計算活細(xì)胞密度；
8）于細(xì)胞培養(yǎng)皿上利用合適細(xì)胞培養(yǎng)基接種細(xì)胞。
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